牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒双重Nano-PCR检测方法的建立与应用

作者：刘占悝; 刘泽余; 李智杰; 孙飞雁; 郭利^*

来源：中国兽医科学, 2019, 49(12): 1499-1504.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0204

• 牛传染性鼻气管炎病毒
• 牛病毒性腹泻病毒
• 双重Nano-PCR

为了对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)同时进行检测,提高检测效率,根据IBRV gE基因序列(GenBank登录号:L27212.1)和BVDV 5′端非编码区序列(GenBank登录号:AY-278459.1)的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1对BVDV的特异性引物,建立用于IBRV和BVDV的双重纳米PCR(Nano-PCR)检测方法。特异性试验结果显示,该方法对牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛轮状病毒和牛冠状病毒均无交叉反应,表明该方法的特异性良好。敏感性试验结果显示,该方法的最低检测量为10 fg/μL,是普通PCR的10倍,表明该方法的敏感性良好。特异性试验与敏感性试验均进行3次重复,结果一致,重复性良好。用建立的方法对38份临床样品进行检测,IBRV、BVDV及IBRV与BVDV的共感染阳性率分别为5.26%、44.74%和2.63%。综上所述,建立的Nano-PCR方法可用来对临床样品的快速诊断和检测,具有特异性强、灵敏度高、重复性好的优点。

• 单位
  吉林农业大学; 农业部; 中国农业科学院特产研究所