MAVS-/-细胞系的构建及其影响禽流感病毒复制的研究

作者：张子博; 田璐; 史鑫琪; 郭慧娟; 陈洪岩; 王金泉^*; 孟庆文^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(03): 344-350.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0050

• MAVS
• MDCK
• CRISPR/Cas9
• H9N2亚型禽流感病毒

本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MAVS基因稳定敲除的细胞株，对流感病毒的增殖特性进行初步研究。设计、构建靶向MAVS基因sgRNA表达载体，与pCAG-Cas9-EGFP表达载体共转染MDCK细胞，经过流式细胞仪分选、PCR、基因测序筛选MAVS敲除细胞系，CCK-8法检测细胞增殖速度；荧光定量PCR方法检测H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染后的TCID50、病毒拷贝数以及IRF3、IFN-β、Mx1基因转录水平变化。结果显示，筛选出1株MAVS基因缺失44 bp的MDCK细胞(MAVS-/-MDCK)，其增殖速度与正常细胞相比未观察到显著差异；荧光定量PCR结果表明，TCID50、病毒拷贝数差异最高可分别达到MDCK细胞的4.11倍和1.82倍；MAVS-/-MDCK中IRF3、IFN-β和Mx1 m RNA表达水平显著降低，表明MAVS敲除后抑制了Ⅰ型干扰素信号通路。表明，本研究获得的MAVS-/-MDCK能够促进禽流感病毒的复制，为提高疫苗生产效率和质量提供候选细胞株；该细胞株也为进一步研究MAVS参与抗病毒天然免疫应答奠定基础。

• 单位
  新疆农业大学; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室