水牛SIRT6基因shRNA干扰慢病毒载体构建与验证

作者：程隽如; 杨素芳; 崔佳瑜; 石德顺; 邓彦飞^*

来源：中国畜牧杂志, 2020, 56(09): 182-186.

DOI：10.19556/j.0258-7033.20191015-04

• SIRT6基因
• 水牛
• 慢病毒载体
• RNA干扰

本研究旨在构建SIRT6基因的RNA干扰慢病毒载体,并在水牛成纤维细胞中验证载体的有效性。设计合成2条特异性水牛SIRT6基因的shRNA序列,分别将其克隆至Psi-LVRU6GP慢病毒干扰载体上,重组质粒通过琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定。将重组质粒与慢病毒包装载体NRF、VSVG共转染293T细胞,荧光显微镜下检查转染效果。转染60 h后收集病毒悬液,并感染水牛胎儿成纤维细胞(BFF),qRT-PCR检测干扰效果。结果显示:成功构建了2个RNA干扰SIRT6基因表达的慢病毒重组质粒;经慢病毒包装感染水牛成纤维细胞后检测SIRT6 mRNA表达水平,干扰载体Psi-sh1-LVRU6GP、Psi-sh2-LVRU6GP均能有效下调SIRT6的表达,与质粒对照组相比差异显著,Psi-sh2-LVRU6GP的干扰效果最好。SIRT6基因shRNA干扰慢病毒载体的成功构建为研究SIRT6基因对水牛细胞衰老的影响及其机制奠定基础。

• 单位
  亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室; 广西大学