miR-200c基因重组慢病毒载体质粒构建及其人结肠癌多药耐药动物模型的建立

作者：刘冲; 隋华; 朱惠蓉; 李冬; 李琦

来源：山东医药, 2015, 55(20): 10-13.

DOI：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.20.004

• 结肠癌
• 多药耐药
• 微小核糖核酸
• 慢病毒载体
• 动物模型
• 活体成像

目的构建共同表达人miR-200c基因和荧光素酶基因的慢病毒(Lentivious)表达载体质粒,实现该重组体在人结肠癌多药耐药细胞中的稳定整合以及动物模型的建立,为进一步研究miR-200c调控大肠癌多药耐药提供实验基础。方法将miR-200c基因克隆至慢病毒p GC-Lentivirus表达载体中,测序鉴定后,包装重组慢病毒表达质粒,并进行滴度测试。利用细胞转染技术,将携带miR-200c过表达的慢病毒载体质粒转染到人结肠癌多药耐药细胞株HCT-116/L-OHP中,并接种于裸鼠皮下,以空病毒载体作为对照。待肿瘤生长2周后,随机分为4组,分别给予生理盐水和奥沙利铂(L-OHP),4周后处死裸鼠,剥取肿瘤,测量肿瘤体积。结果病毒滴度测试最佳滴度为2×108TU/m L。q PCR结果显示,转染miR-200c-Lentivirus病毒质粒的人结肠癌耐药细胞中miR-200c表达高于转染空载体组以及空白对照组,P均<0.01。活体成像观察证实,带有荧光素酶的HCT-116/L-OHP-miR-200c-luc细胞在动物体内可被快速而灵敏的检测到,可以准确地观察肿瘤的生长情况。与HCT-116/L-OHP-luc组相比,HCT-116/L-OHP-miR-200c-luc组对L-OHP的敏感性更强,P<0.05。结论成功构建携带人miR-200c基因慢病毒载体质粒,实现重组体在人结肠癌HCT-116/L-OHP多药耐药细胞中的稳定整合,并建立了带有荧光素酶miR-200c过表达的人结肠癌多药耐药动物模型。

• 单位
  上海中医药大学附属曙光医院; 同济大学; 同济医院