携带甲胎蛋白基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及其对靶基因的沉默效率

作者：程木华; 李建芳; 张峰; 曾凤伟; 谢良骏

来源：中华生物医学工程杂志, 2012, 18(5): 380-383.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2012.05.009

• 癌
• 肝细胞
• 甲胎蛋白类
• RNA干扰
• 基因表达调控
• 慢病毒属

目的 构建携带甲胎蛋白(AFP)基因小干扰RNA(siRNA)的慢病毒载体并转染肝癌细胞,评价其对AFP基因的沉默效率.方法 设计和构建针对AFP基因的阳性siRNA及不针对任何已知基因的阴性siRNA,将其分别插入携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组慢病毒载体,然后转染到表达AFP基因的人肝癌细胞HepG2并筛选阳性表达细胞株,分别为慢病毒转染阳性siRNA组和慢病毒转染阴性siRNA组.同时设立脂质体转染阳性siRNA组、脂质体转染阴性siRNA组以及加AFP siRNA而未用转染试剂的siRNA组、空白对照组.荧光显微镜观察评估转染效率,荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组HepG2细胞APF mRNA及蛋白的相对表达量,比较不同转染方法对AFP基因表达的抑制率.结果 慢病毒能够有效地转染siRNA到HepG2细胞内.荧光定量PCR显示慢病毒转染siRNA对AFP mRNA表达的抑制率显著高于脂质体转染siRNA(92.1％比74.3％,P＜0.05).免疫印迹亦显示慢病毒转染siRNA对AFP蛋白表达的抑制率显著高于脂质体转染siRNA(88.2％比63.7％,P＜0.05).结论 慢病毒转染AFP siRNA能够更有效地抑制HepG2细胞内AFP基因表达.

• 单位
  中山大学附属第三医院