重组人CD40 L功能性片段在CHO细胞中的表达

作者：陈华; 蒋玉辉; 曹开源; 吴梧桐

来源：药物生物技术, 2008, (02): 115-117.

• CD40配体
• CHO细胞
• 表达
• 生物活性

克隆人CD40 L基因功能性片段(E107-L261),并在CHO细胞中进行表达。从健康人扁桃体组织中提取总RNA,通过RT-PCR技术,扩增CD40 L胞外区cDNA功能性片段,经DNA测序证实后,将得到的片段基因插入pcDNA3.0表达载体,构建了pcDNA3.0-hCD40 L真核表达载体。将重组质粒pcDNA3.0-hCD40 L转染CHO细胞,经G418筛选出阳性细胞克隆,扩大培养,提取细胞总蛋白,用SDS-PAGE分离并western blot-ting鉴定其特异性,通过小鼠脾淋巴细胞增值实验检验其生物学活性。结果,CD40 L胞外区功能性片段(E107-L261)cDNA被正确克隆到真核表达载体pcDNA3.0中并在CHO中成功表达,具有免疫学和生物学活性。结论:真核表达载体pcDNA3.0-CD40 L的成功构建并在CHO中成功表达。

• 单位
  广东省药品检验所; 中山大学; 中国药科大学