N-糖酰胺酶PNGase H+最小糖结构作用底物的研究

作者：胡孝春; 王婷; 蔡志鹏; 刘丽^*; JOSEF Voglmeir^*

来源：食品工业科技, 2019, 40(11): 12-22.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2019.11.003

• 酶法合成
• +" name="keyword">N-糖酰胺酶PNGase H+
• 最小糖结构
• 底物

为探究N-糖酰胺酶的最小糖结构作用底物,以丹磺酰氯标记的复杂型七糖糖肽标准品为初始底物,运用酶法合成的方法来获得目标底物,分别使用β-N-乙酰氨基己糖苷酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶和β-半乳糖基转移酶,制备出五种不同糖结构的糖肽底物,将制备的目标底物应用于N-糖酰胺酶PNGase H+最小糖结构作用底物的研究中。通过高效液相色谱检测PNGase H+对这5种糖肽底物的酶解效果。结果表明,得到五种不同结构的糖肽底物,Dabsyl-Gly-Glu-Asn-(GlcNAc2Man3)-Arg、Dabsyl-Gly-Glu-Asn-(GlcNAc2Man)-Arg、Dabsyl-Gly-Glu-Asn-(GlcNAc2)-Arg、Dabsyl-Gly-Glu-Asn-(GlcNAc)-Arg及Dabsyl-Gly-Glu-Asn-(GlcNAc2Gal)-Arg,浓度分别为8.3、7.0、6.5、4.5、6.5 pmol/μL。N-糖酰胺酶PNGase H+能够作用糖单元数为二、三和五的糖肽底物,而对含有单个N-乙酰葡糖胺的糖肽几乎没有作用,进而推断PNGase H+的最小糖结构作用底物为带有N-乙酰壳二糖的糖肽。

• 单位
  南京农业大学