摘要
目的 探讨体外敲低BCLAF1对乳腺癌细胞增殖和铁死亡的影响。方法 应用shRNA干扰乳腺癌细胞株MCF-7和SUM-159细胞中BCLAF1的表达;采用Western blot法鉴定干扰效果;运用MTT和CCK-8法检测各组细胞增殖活性;采用克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;应用流式细胞术测定细胞的活性氧(ROS)水平;运用MTT和CCK-8法检测对铁死亡诱导剂RSL3的敏感性。结果 敲低组与对照组相比,在MCF-7和SUM-159细胞中稳转BCLAF1-shRNA后,BCLAF1的表达水平明显下降(P<0.001)。在MCF-7细胞中,第5天的pLKO.1组吸光度(2.52)高于shBCLAF1-1组(2.14)和shBCLAF1-2组(2.17);在SUM-159细胞中,第5天的pLKO.1组吸光度(1.22)高于shBCLAF1-1组(0.99)和shBCLAF1-2组(0.80)(P<0.001)。当在MCF-7细胞中设定pLKO.1组细胞ROS比例为17.77%,则shBCLAF1-1组和shBCLAF1-2组的ROS比例分别为67.63%和74.37%;在SUM-159细胞中设定pLKO.1组细胞ROS比例为15.62%,则shBCLAF1-1组和shBCLAF1-2组的ROS比例分别为70.19%和78.69%(P<0.001)。RSL3抑制MCF-7细胞pLKO.1组、shBCLAF1-1组和shBCLAF1-2组的IC50分别为7.32、5.95和5.01μmol/L;RSL3抑制SUM-159细胞pLKO.1组、shBCLAF1-1组和shBCLAF1-2组的IC50分别为0.023、0.015和0.008μmol/L(P<0.001)。结论 沉默BCLAF1的表达可抑制乳腺癌的增殖能力、增加乳腺癌细胞的ROS水平及提高乳腺癌细胞对铁死亡诱导剂的敏感性,BCLAF1的表达可能增加乳腺癌对铁死亡的抗性。
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单位基础医学院; 中国科学技术大学