禽呼肠孤病毒99G株σB编码基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

作者：张云; 郝雪; 耿宏伟; 郭东春

来源：中国兽医科学, 2008, (05): 407-411.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2008.05.008

• 禽呼肠孤病毒
• σB基因
• 原核表达 avian reovirus
• σB gene
• prokaryotic expression

采用RT-PCR方法扩增禽呼肠孤病毒(ARV)99G株σB编码基因,序列分析表明,99G株σB编码基因与其他禽呼肠孤病毒的同源性为90%~99%,而与我国番鸭呼肠孤病毒S12株的同源性仅有60%;用BamHⅠ和XhoⅠ酶将σB编码基因切下并克隆到表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组表达质粒pGEX-σB;鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,σB基因在大肠杆菌中得到了高效表达,表达的融合蛋白占总蛋白的41.46%,融合蛋白的分子质量为66 ku,主要以包涵体形式存在;Western-blot结果显示,该融合蛋白能与抗ARV阳性血清发生特异性反应,表明重组蛋白具有良好的反...

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所