利用正交实验设计优化马铃薯NBS-profiling反应体系

作者：王颖; 卢丽丽; 周福仙; 李先平; 隋启君^*; 潘哲超^*

来源：分子植物育种, 2018, 16(21): 7057-7062.

DOI：10.13271/j.mpb.016.007057

• 马铃薯
• NBS profiling
• 正交设计

本研究以马铃薯品种自来洋芋为实验材料,利用正交试验的方法对影响马铃薯NBS profiling体系稳定性的7个主要因素:PCR Buffer体积、dNTP浓度、Taq酶活力、DNA模板浓度、引物浓度、引物接头浓度及稀释倍数,进行4水平设计,选用L32(47)正交表,以PCR产物的多态性为评价标准进行优化试验,从而建立多态性最高的反应体系。结果表明,马铃薯NBS profiling体系的优化反应体系最终确定为:在25μL体系中,10×PCR Buffer体积为2.5μL、dNTP浓度为250μmol/L、Taq酶活力为0.02 U、DNA模板浓度为400 ng、引物浓度为30μmol/L、引物接头浓度为20μmol/L,并将第1次PCR产物稀释10倍,该优化体系可有效提高NBS-Profiling的多态性。NBS-Profiling技术在马铃薯种质资源的抗病基因挖掘方面具有重要的应用价值,因此优化NBS-Profiling反应体系,确定多态性最高的反应体系对该方法的应用具有重要作用。

• 单位
  农业部; 云南省农业科学院经济作物研究所