RNA干扰沉默ADM基因对胰腺癌细胞转移潜能影响研究

作者：张萌; 孙岩; 田伟军

来源：中华肿瘤防治杂志, 2015, 22(19): 1534-1539.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2015.19.008

• 胰腺肿瘤
• 肾上腺髓质素
• RNA干扰
• 肿瘤转移
• 肿瘤侵润
• 印迹法,蛋白质

目的探讨通过RNAi技术靶向沉默肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)基因对人胰腺癌细胞系Miapaca-2侵袭和迁移能力的影响。方法合成含双shRNA沉默靶点的质粒Pgenesil ADM及阴性对照组质粒Pgenesil HK。实验分为空白对照组、空质粒Pgenesil KB组、阴性质粒Pgenesil HK组及实验组Pgenesil ADM组,后3组分别用脂质体转染质粒Pgenesil KB、Pgenesil HK、Pgenesil ADM至Miapaca-2胰腺癌细胞。转染48h后,实时荧光定量PCR检测细胞中ADM mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞中ADM蛋白的表达;Transwell侵袭、迁移实验检测各组胰腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果 4组胰腺癌细胞ADM mRNA表达差异有统计学意义,χ2=8.757,P=0.033;Pgenesil ADM组ADM mRNA表达水平为0.450,显著低于空白对照组的1.000、Pgenesil KB组的0.970和Pgenesil HK组的0.940,z值均为-2.309,P值均为0.029。4组ADM蛋白表达水平差异有统计学意义,χ2=8.625,P=0.035;Pgenesil ADM组ADM蛋白表达水平为0.21±0.09,显著低于空白对照组的0.46±0.07、Pgenesil KB组的0.43±0.11和Pgenesil HK组的0.42±0.08,z值均为-2.309,P值均为0.029。4组侵袭实验细胞数差异有统计学意义,χ2=9.088,P=0.028;Pgenesil ADM组细胞计数为40.8±7.3,显著低于空白对照组的118.8±13.6、Pgenesil KB组的108.0±8.0和Pgenesil HK组的110.6±9.2,z值均为-2.309,P值均为0.029。迁移实验细胞计数差异也有统计学意义,χ2=9.022,P=0.029;Pgenesil ADM组细胞计数为80.8±5.4,显著低于空白对照组的187.4±9.6、Pgenesil KB组的177.6±9.1和Pgenesil HK组的176.0±13.3,z值均为-2.309,P值均为0.029。结论利用RNAi技术靶向沉默ADM mRNA可降低Miapaca-2胰腺癌细胞中ADM mRNA和蛋白表达水平,进而减弱Miapaca-2胰腺癌细胞的侵袭和迁移能力,这为胰腺癌的临床治疗提供了新的思路。

• 单位
  潍坊市益都中心医院; 天津医科大学总医院