急性B淋巴细胞白血病REH细胞对雷帕霉素敏感性与mTOR通路激活的关系

作者：吴文齐; 刘超; 陈晓燕; 段永娟; 郑佳睿; 张英驰; 竺晓凡^*

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2019, 33(12): 1145-1149.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2019.12.001

• 急性淋巴细胞白血病
• CRISPR-Cas9
• nprl2
• mTOR

目的探讨在急性B淋巴细胞白血病细胞系REH中敲除抑制哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)活性的基因nprl2后,细胞对雷帕霉素的敏感性。方法构建靶向nprl2基因的CRISPR-Cas9载体,并包装为病毒CRISPR-Cas9-nprl2-sg1、CRISPR-Cas9-nprl2-sg2、CRISPR-Cas9-nprl2-sg3感染REH细胞(分别为REH-nprl2-sg1、REH-nprl2-sg2和REH-nprl2-sg3细胞),感染72 h后采用1 mg/L的嘌呤霉素处理72 h,提取细胞DNA进行PCR,进行一代测序,测序结果为杂峰的是感染成功细胞(REH-nprl2-sg1)(敲除组)。REH细胞感染不含sgRNA的CRISPR-Cas9质粒空载体为对照组。采用实时定量PCR检测2组细胞nprl2 mRNA表达水平,采用CCK8法检测2组细胞培养第1～7天细胞活性,计算细胞增殖倍数;2组分别加入0.1、1、10、100、1 000、10 000 nmol/L雷帕霉素,培养72 h后检测细胞活性,比较雷帕霉素对2组细胞的半数抑制浓度。结果敲除组细胞nprl2 mRNA相对表达量(0.012 3±0.002 7)低于对照组(0.833 0±0.070 8)(P<0.05);敲除组第5～7天细胞增殖倍数(15.134±0.312、20.589±0.436、37.595±0.917)高于对照组(13.690±0.106、17.920±0.291、18.817±0.217)(P<0.05),第1～4天与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);1、10、100、1 000、10 000 nmol/L雷帕霉素处理后,敲除组细胞活性(0.806±0.001、0.478±0.013、0.323±0.002、0.274±0.008、0.279±0.003)较对照组(1.000±0.011、0.711±0.045、0.538±0.034、0.432±0.019、0.403±0.025)明显降低(P<0.05),敲除组雷帕霉素对细胞半数抑制浓度(0.48 nmol/L)小于对照组(2.07 nmol/L)。结论敲除nprl2后的REH细胞对雷帕霉素的敏感性明显提高,在伴有mTOR通路突变的急性B淋巴细胞白血病患者中联合使用雷帕霉素可能有较好治疗效果。

• 单位
  中国医学科学院血液学研究所; 天津医科大学; 中国医学科学院北京协和医学院; 基础医学院; 实验血液学国家重点实验室