铜绿假单胞菌快速检测胶体金免疫层析试纸的制备

作者：张世凯; 朱辉煌; 李家吉; 王毅; 胡征^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(08): 941-954.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003967

• 铜绿假单胞菌
• 外膜蛋白OprF
• 单克隆抗体
• 胶体金免疫层析试纸

目的 研制快速、准确检测铜绿假单胞菌(P.aeruginosa,Pa)的胶体金免疫层析试纸。方法 采用生物信息学对铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF进行分析后，化学合成抗原决定簇丰富、种内同源性高的基因序列，连接至pET-28a(+)载体，构建表达载体pET-28a-OprF，转入E.coli BL21(DE3)中，IPTG诱导表达，表达产物经Ni SepharoseTM6 Fast Flow纯化。将纯化的重组OprF蛋白免疫2只雌性BALB/c小鼠，共免疫3～4次，首次免疫为背部皮下多点注射，后续免疫为腹腔注射。通过动物细胞融合技术筛选单克隆抗体，利用单克隆抗体、双抗夹心免疫层析技术制备铜绿假单胞菌快速检测胶体金免疫层析试纸，并评价其特异性、灵敏度及稳定性。结果 获得2株可配对的单克隆抗体Pa-1#和Pa-2#，抗体效价均达到1∶409 600，均可特异性识别OprF。制备的胶体金免疫层析试纸检测灵敏度为1.0×106CFU/mL，与9种常见的呼吸道病原菌无交叉反应，且稳定性较好。结论 制备的胶体金免疫层析试纸可在15 min内快速检测铜绿假单胞菌，特异性强，且具有良好的稳定性。

• 单位
  湖北工业大学