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摘要
将CRISPR/Cas12a系统与跨越式滚环等温扩增技术(saltatory rolling circle amplification,SRCA)相结合，建立一种快速、灵敏定量检测海产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)的方法(SRCA-Cas12a)。通过SRCA扩增靶标DNA,CRISPR/Cas12a系统识别靶标DNA并裂解单链报告探针，从而建立SRCA-Cas12a检测方法。分析该方法的特异性与灵敏度，并进行加标回收实验和实际样品检测。结果显示该方法可区分副溶血性弧菌和其他食源性致病菌，特异性良好。在最优检测体系下，建立了副溶血性弧菌菌液浓度的对数与荧光信号强度的线性关系，线性方程为y=1.847 2x+2.473 8(R2=0.986 6)，检出限为3.6 CFU/mL(RSN=3)。在人工污染样品中副溶血性弧菌的加标回收率为95.5%～104.4%。在实际样品检测中，该方法的敏感性为100.0%、特异性为95.2%、符合率为97.2%。本研究所建立的SRCA-Cas12a方法具有特异性好、检测限低的优点，为副溶血性弧菌的快速定量检测提供了一种新策略。
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