重组猪胰蛋白酶及其R122位点突变体在毕赤酵母中的高效表达及其性质研究

作者：张潘潘; 许延吉; 王之可; 刘晓; 李素霞

来源：中国生物工程杂志, 2018, 38(05): 56-65.

DOI：10.13523/j.cb.20180508

• 重组猪胰蛋白酶
• 毕赤酵母
• 突变体
• mRPT(R122H)
• mRPT(R122H/R73G/R130T)
• 性质
• 稳定性

目的:研究R122位点突变重组猪胰蛋白酶,与野生型酶相比较,该位点对重组猪胰蛋白酶(RPT)性质的影响。方法:以毕赤酵母GS115作为表达宿主,对RPT、突变体mRPT(R122H)和mRPT(R122H/R73G/R130T)进行表达及纯化。并对其性质和稳定进行对比研究。结果:重组胰蛋白酶及其突变体在毕赤酵母中均获得了高效表达。相对于RPT,突变体mRPT(R122H)和mRPT(R122H/R73G/R130T)在以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)为底物时,具有更强底物结合力,三者的米氏常数分别为18.8μmol/L、9.0μmol/L和11.0μmol/L;两突变体耐高温耐碱能力增强;在Ca2+存在及去除的条件下,突变体具有更强的抗自降解能力。结论:可以利用毕赤酵母高效表达重组胰蛋白酶及其突变体。mRPT(R122H)和mRPT(R122H/R73G/R130T)相对于野生型RPT,对高p H条件和高温的耐受性增强,该稳定性的提高主要归因于R122位点的突变。

• 单位
  生物反应器工程国家重点实验室