大鼠骨骺干细胞的分离鉴定及其永生化细胞株的构建

作者：张树威; 陈安民; 郭风劲; 胡伟华; 李明辉; 廖晖; 祝文涛; 宋登新

来源：中国矫形外科杂志, 2007, (16): 1245-1248.

DOI：10.3969/j.issn.1005-8478.2007.16.015

• 骨骺干细胞
• 永生化
• 猿肾病毒40

[目的]分离、鉴定大鼠骨骺干细胞并建立永生化的大鼠骨骺干细胞株,为细胞移植和转基因治疗提供稳定的细胞来源。[方法]采用Percoll不连续密度梯度离心法分离骨骺干细胞,利用电穿孔转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)的质粒pCMVSV40T/PUR转染骨骺干细胞,经嘌呤霉素筛选,抗性克隆扩大培养。应用FGFR-3抗体和PCNA抗体进行免疫细胞化学染色,观察细胞的形态及其生长状况并绘制细胞生长曲线。用免疫细胞化学法和RT-PCR检测SV40Tag在转染细胞中的表达。[结果]转染后获得一个阳性细胞克隆,免疫细胞化学结果显示FGFR-3抗体染色阳性。SV40Tag抗体染色和RT-PCR结果显示SV40Tag已稳定转染入骨骺干细胞。转染细胞经扩大培养,命名为永生化骨骺干细胞。[结论]成功纯化大鼠骨骺干细胞并构建了SV40Tag永生化的骨骺干细胞株。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院