人IL-3基因原核表达载体的构建及表达

作者：严学倩; 尹郸丹; 付伟; 韩骅; 梁英民

来源：现代生物医学进展, 2011, (15): 2832-2835.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2011.15.003

• 白细胞介素3
• 造血干细胞
• 原核表达 Interleukin-3
• Hematopoietic stem cells
• Prokaryotic expression

目的:构建人IL-3基因原核表达载体pET32a-IL-3,并在大肠杆菌中诱导表达。方法:通过佛波酯(TPA)和植物球血凝素(PHA)刺激人T淋巴细胞系Jurkat细胞,增加IL-3mRNA表达水平,提取mRNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得cDNA,以Jurkat细胞cDNA为模板,通过PCR方法扩增得到人IL-3基因,将其克隆入原核表达载体pET32a( )中,将重组质粒转化入大肠杆菌宿主菌株BL21中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,并通过改变IPTG浓度,诱导时间,诱导温度等条件最终实现蛋白的可溶性表达。表达产物用SDS-PAGE检测表达情况。结果:酶切鉴...

• 单位
  第四军医大学