经外泌体释放的高迁移率族蛋白B1在菌群紊乱非酒精性脂肪性肝病小鼠中的表达及Toll样受体4信号的调控作用

作者：孙焕焕; 李培杰; 冯云; 刘梦莹; 师文; 马富权; 和水祥^*

来源：解放军医学杂志, 2023, 48(11): 1314-1320.

• 非酒精性脂肪性肝病
• 脂肪性肝炎
• 高迁移率族蛋白B1
• 外泌体
• Toll样受体4

目的 探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠中肠源性及肝源性高迁移率族蛋白B1(HMGB1)经外泌体的释放情况及其调控途径。方法 15只雄性8周龄野生型C57BL/6J小鼠及10只合并肠道菌群紊乱的NAFLD小鼠(ASC-/-)模型。10只野生型小鼠喂食正常饲料(ND)为正常对照组、喂养高脂饮食(HFD)为高脂饮食组，每组5只，另外5只用于了解造模情况。10只ASC-/-小鼠分别喂养ND(菌群紊乱组)及HFD(高脂菌群紊乱组)，每组5只。共喂养8周。采用共聚焦显微镜检测肝脏及肠黏膜外泌体标志物与HMGB1共定位情况；采用Western blotting及PCR等方法检测外泌体中HMGB1含量。通过棕榈酸(PA)及脂多糖(LPS)处理AML12细胞24 h构建体外模型，采用Western blotting检测HMGB1/CD63水平，并通过siRNA干预探讨经外泌体释放的调控机制。结果 高脂饮食组的外泌体分泌较正常对照组增多[(3.5±0.2) ng/ml vs.(1.1±0.3) ng/ml,P<0.05]，高脂菌群紊乱组的外泌体亦高于菌群紊乱组[(3.2±0.2)ng/ml vs.(1.9±0.4) ng/ml,P<0.05]。免疫荧光检测结果显示，体内实验高脂饮食组与正常对照组比较，体外实验高脂内毒素组与空白对照组比较，外泌体标记物(ALP或VPS16)与HMGB1的共定位增加。PCR检测发现，高脂饮食组肝细胞外泌体中的HMGB1较正常对照组升高(41.5±10.2 vs.1.3±0.3,P<0.05)，高脂菌群紊乱组较菌群紊乱组升高(48.6±7.2 vs. 1.5±0.5,P<0.05)；高脂饮食组TLR4较正常对照组升高(13.8±6.2 vs. 2.8±0.9,P<0.05)，高脂菌群紊乱组较菌群紊乱组升高(22.6±4.1 vs. 2.5±1.5,P<0.05)。在肠黏膜细胞中，高脂饮食组较正常对照组(0.6±0.2 vs. 0.4±0.1,P<0.05)及高脂菌群紊乱组较菌群紊乱组(0.9±0.2 vs. 0.5±0.1,P<0.05)中HMGB1与外泌体标记物(CD63)共显影增加。在体外实验中，内毒素组、高脂内毒素组外泌体的HMGB1(5.1±0.8,5.5±0.7)均较空白对照组(3.8±0.6)增加(P<0.05)，而siRNA干预组与空白对照组比较无明显差异(3.7±0.6 vs. 3.8±0.6,P>0.05)。结论 在高脂饮食及肠道菌群紊乱环境下，HMGB1在肝细胞及肠细胞中经外泌体释放，并受TLR4调控，可能是促进脂肪性肝炎发展的因素之一。

• 单位
  第一附属医院消化内科; 西安交通大学