表达肠道病毒71型中和表位融合基因的重组耻垢分枝杆菌的构建及其免疫原性初步评价

作者：梁思佳; 吴岳; 石春薇^*; 刘洪波^*

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(09): 974-977+982.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003137

• 肠道病毒71型
• 中和表位
• 基因重组
• 耻垢分枝杆菌

目的构建表达嵌合肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)中和表位VP1-SP70(E1)和VP2-141(E2)融合蛋白HBc-E1/2的重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,MS),并评价其在小鼠体内的免疫原性。方法 PCR法扩增目的基因HBc-E1/2,并克隆至E.coli-分枝杆菌穿梭载体pMV261,构建重组质粒pMV261-HBc-E1/2,电转化至mc2 155(MS野生株ATCC 607的突变体),获得重组菌pMV261-HBc-E1/2/mc2 155,将其经腹腔免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pMV261-HBc-E1/2构建正确。重组菌pMV261-HBc-E1/2/mc2 155表达产物可与E1多肽、E2多肽及EV71灭活疫苗小鼠免疫血清发生特异性结合,且在相对分子质量约27 500和55 000处可见特异性蛋白结合条带。免疫小鼠血清抗E1及E2表位抗体效价均为1∶1 600。结论成功构建了呈递HBc-E1/2的重组MS,可诱导小鼠产生EV71的特异性抗体。本实验为手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)新型疫苗的研发奠定了基础。

• 单位
  基础医学院; 华中科技大学同济医学院; 桂林医学院