PDX-1基因克隆载体的体外构建

作者：汪珊珊; 陈明卫

来源：山东医药, 2016, 56(04): 31-33.

• 胰-十二指肠同源框-1
• cDNA
• 胰岛细胞瘤
• 克隆载体

目的体外构建胰-十二指肠同源框-1(PDX-1)基因的克隆载体。方法采用TRIzol方法从大鼠胰岛细胞瘤细胞株中提取RNA,通过RT-PCR方法在体外扩增大鼠PDX-1 c DNA,琼脂糖凝胶电泳鉴定,割胶纯化后回收目的基因,与p MD-18T克隆载体连接构建,经限制性内切酶双酶切及DNA序列分析鉴定p MD-18T-PDX-1的正确构建。结果正确构建了含有PDX-1 c DNA的克隆载体p MD-18T-PDX-1,其中PDX-1 c DNA全长为908 bp。将经双酶切鉴定正确的p MD-18T-PDX-1细菌克隆进行测序,测定结果与Gen Bank中大鼠PDX-1基因序列(NM022852.3)一致。结论成功构建了PDX-1基因克隆载体。该载体可为PDX-1基因分子生物学研究及PDX-1基因在诱导非β细胞向胰岛素分泌细胞分化中作用机制的研究提供基础。

• 单位
  安徽省第二人民医院; 安徽医科大学第一附属医院