甜瓜半粒干种子DNA提取方法的优化

作者：夏玲; 梁昕景; 王学林; 杨小锋^*

来源：南方农业学报, 2019, 50(07): 1426-1431.

DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2019.07.04

• 甜瓜
• 干种子
• DNA提取
• CTAB法
• 优化

【目的】优化甜瓜半粒干种子DNA提取方法,为甜瓜相关分子研究提供技术支持。【方法】以甜瓜半粒干种子为材料,比较改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法和尿素法4种提取方法的DNA提取效果,并对改良CTAB法中的提取液CTAB浓度、裂解时间、苯酚抽提次数等进行优化,以琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分别检测DNA的质量和纯度。最后通过SSR分析验证优化后改良CTAB法提取DNA的效果。【结果】4种提取方法中,改良CTAB法提取的DNA提取率最高,且DNA质量和纯度均高于其他提取方法。优化得到改良CTAB法的最佳提取条件为:提取液CTAB浓度2%,裂解时间20 min,苯酚抽提1次[先用苯酚/氯仿/异戊醇(25∶24∶1)抽提1次,再用氯仿/异戊醇(24∶1)抽提1次]。在此条件下,提取的甜瓜半粒干种子DNA质量和纯度较好,以此为模板进行SSR分子标记分析时,电泳条带稳定、清晰,基本无杂带,可清楚区分品种间的差异。【结论】优化后的改良CTAB法提取甜瓜半粒干种子DNA效果较好,可满足甜瓜种子分子标记和遗传多样性分析等分子实验需求。

• 单位
  三亚市南繁科学技术研究院