PPARγ1的SUMO化修饰对巨噬细胞M2极化的抑制作用

作者：王秀芝; 左勇^*

来源：上海交通大学学报 (医学版), 2019, 39(12): 1402-1408.

• 过氧化物酶体增殖物激活受体γ1
• SUMO化修饰
• SENP1
• 巨噬细胞
• M2极化

目的·探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ1(peroxisome proliferator activated receptorγ1,PPARγ1)的SUMO化修饰在白介素4(interleukin-4,IL-4)诱导巨噬细胞M2极化过程中的作用和机制。方法·在HEK293T细胞中共转染FLAG-PPARγ1-WT/突变体质粒、HA-SUMO1质粒,使用标签FLAG及HA的抗体分别进行免疫共沉淀后进行蛋白质印迹分析,确认PPARγ1的SUMO化修饰和修饰位点。过表达FLAG-PPARγ1-WT、HA-SUMO1及野生型RGS-SENP1以及去SUMO化修饰酶活缺失的突变体RGSSENP1mut,证明SENP1是PPARγ1的去SUMO化修饰酶。用IL-4刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7和体外分离的原代小鼠腹腔巨噬细胞,使其向M2型活化,使用PPARγ及SUMO1的抗体进行免疫共沉淀,明确内源性PPARγ1的SUMO化修饰在M2极化过程中的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-4刺激后的PPARγ1野生型及突变型稳转细胞系RAW264.7中M2相关基因的m RNA水平。用染色质免疫共沉淀实验比较PPARγ1 WT及突变体结合于精氨酸酶Ⅰ(arginaseⅠ,Arg1)启动子的能力。结果·PPARγ1蛋白第77位赖氨酸(K77R)能被SUMO化修饰,并能被SENP1去SUMO化。在IL-4诱导巨噬细胞M2型极化时,PPARγ1的SUMO化水平降低。稳定表达SUMO化位点突变体PPARγ1-K77R的RAW264.7细胞,Arg1 mRNA水平升高;PPARγ1-K77R与Arg1的启动子结合能力增强,促进Arg1表达。结论·PPARγ1通过去SUMO化促进下游Arg1基因的表达从而参与调控巨噬细胞M2型极化。

• 单位
  上海交通大学; 基础医学院