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摘要
目的体外模拟低硒(Se)条件,检测Se对人肾小球系膜细胞硒蛋白的表达影响。方法低硒条件(0.5%胎牛血清)处理人肾小球系膜细胞系(HMCs)5 d,紧接着以不同浓度(0、10 nM、25 nM、50 nM、100 nM、250 nM)亚硒酸钠刺激细胞不同时间(0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h),建立HMCs低硒及补硒细胞模型。低硒培养HMCs 0~9 d,使用细胞谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶活性。RT-PCR法检测标准培养条件下HMCs25种硒蛋白表达谱。实时定量PCR法及western-blotting法检测补硒实验中硒蛋白表达变化。结果人体25种硒蛋白中的21种可被检测到,仅有4种硒蛋白(GpX2,GpX3,GpX6和DIO1)的表达未达到可被检测到的水平。低硒培养条件下,9种硒蛋白的表达显著下调,包括:GpX1、TrxR2、DIO2、DIO3、SelH、SelN、SelR、SelT、SelW。其中,GpX1、SelN、SelW的表达对浓度梯度和时间梯度的补硒敏感。结论 HMCs的硒蛋白GpX1、SelN、SelW的表达受浓度梯度和时间梯度补硒的影响。进一步的研究需要集中在Se对硒蛋白表达的调控和其在CKD进展中的作用上。
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