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摘要
目的构建溪黄草与线纹香茶菜的简单重复序列区间(inter-simple sequence repeat,ISSR)反应体系,为溪黄草药材种质资源的遗传多样性分析奠定基础。方法通过设定溪黄草ISSR-PCR的各反应因子的不同梯度,对反应条件进行优化,建立适合溪黄草与线纹香茶菜的ISSR反应体系;以溪黄草DNA为模板,用该体系对100条引物进行初筛,用线纹香茶菜进行复筛,并用23个溪黄草、16个线纹香茶菜单株样品验证体系稳定性。结果建立了溪黄草和线纹香茶菜ISSR最佳反应体系(25μL):2×Taq Master Mix 12.5μL(Mg2+浓度4mmol·L-1,d NTP浓度0.4 mmol·L-1)、引物0.6μmol·L-1、模板DNA 10 ng。结论建立的溪黄草和线纹香茶菜的ISSR反应体系稳定可靠、标记位点清晰、检测多态性能力强,可较好地应用于溪黄草与线纹香茶菜的ISSR遗传多样性分析的研究。
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