高危型HPV16 E6蛋白通过活性氧途径介导宫颈癌细胞增殖的研究

作者：王军; 袁文; 袁纯辉; 沈芯; 孙红; 向贇^*

来源：中华肿瘤防治杂志, 2021, 28(17): 1308-1313.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2021.17.06

• 宫颈癌
• HPV16 E6蛋白
• 活性氧
• 增殖
• 顺铂

目的探讨高危型人类乳头瘤病毒(HPV)16 E6蛋白促进宫颈癌细胞增殖的潜在作用机制,为降低宫颈癌患者对顺铂耐药性提供新的重要指导。方法将宫颈癌C33A(HPV-)空载细胞作为对照组,高危型HPV16 E6过表达C33A-E6细胞作为实验组。采用细胞计数盒8(CCK8)法观察高危型HPV16 E6蛋白对C33A空载/E6过表达2组细胞增殖的影响;流式细胞仪检测高危型HPV16 E6蛋白对C33A空载/E6过表达2组细胞内活性氧(ROS)水平及细胞凋亡的影响;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测顺铂对C33A空载/E6过表达2组细胞的生长抑制状况及其半抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测5 mmol/L ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)/IC50顺铂分别处理C33A空载/E6过表达2组细胞后,细胞内ROS水平及细胞凋亡状况;CCK8法评估NAC/顺铂对细胞增殖的影响。结果与C33A空载细胞相比,C33A-E6过表达细胞光密度D(450 nm)增长更明显,36 h时,C33A空载细胞D(450 nm)为1.87±0.12,C33A-E6过表达细胞D(450 nm)为2.67±0.17,差异有统计学意义,F=15.04,P<0.000 1;C33A-E6过表达的细胞内ROS含量也由C33A空载组的(3.87±0.35)%上升为C33A-E6过表达组的(14.16±2.72)%,差异有统计学意义,χ2=10.59,P=0.009;NAC处理细胞24 h后,2组细胞内ROS水平分别降至(0.65±0.12)%和(0.93±0.25)%,差异无统计学意义,χ2=0.194,P=0.864;细胞增殖能力较未加入NAC处理组细胞均有下降,差异有统计学意义,F=42.50,P<0.001。C33A空载细胞凋亡率为(6.43±2.17)%,C33A-E6过表达细胞凋亡率为(5.82±1.68)%,差异无统计学意义,χ2=1.326,P=0.314;但使用NAC抑制剂后可降低细胞的凋亡水平,C33A空载组由(7.35±2.11)%下降为(4.07±1.28)%,C33A-E6过表达组由(5.77±1.13)%下降为(1.88±0.52)%,差异有统计学意义,χ2=5.427,P=0.008。MTT实验显示,2组细胞对顺铂的敏感度不同,C33A空载和C33A-E6过表达细胞的IC50分别为4.726和3.481 mg/L,顺铂可促进2组细胞内ROS的生成(χ2=4.864,P=0.013),抑制细胞增殖,F=170.7,P<0.001。结论高危型HPV16 E6蛋白可显著促进C33A宫颈癌细胞增殖,其机制可能与高危型HPV16 E6蛋白激活ROS的生产密切相关,升高宫颈癌细胞内ROS水平可成为治疗宫颈癌的一个潜在方法。

• 单位
  武汉市妇幼保健院; 华中科技大学同济医学院