L-02-hNTCP稳定表达细胞系的建立与鉴定

作者：李瑞明; 贺昱霖; 程彬; 魏志强; 孟忠吉^*

来源：中西医结合肝病杂志, 2021, 31(06): 524-527.

• 乙型肝炎病毒
• hNTCP
• 病毒进入

目的:建立L-02-hNTCP稳定表达细胞系并筛选对HBV感染性颗粒敏感的克隆,为研究HBV入侵细胞的机制及药物筛选提供基础。方法:用Lipofectamine 3 000转染h NTCP真核表达质粒至L-02细胞,加入含嘌呤霉素(0.5μg/ml)培养基筛选耐药克隆,进一步用免疫荧光筛选h NTCP高表达克隆,RT-PCR定量h NTCP转录水平;在L-02-hNTCP细胞培养基中加入HBV感染性病毒颗粒,ELISA检测培养上清HBV抗原水平,免疫荧光检测细胞内HBc Ag,Real-time PCR检测复制中间体。结果:从92个耐药克隆中筛选获得1株h NTCP高表达克隆,命名为L-02-hNTCP。L-02-hNTCP胞内检测到高水平的h NTCP mRNA,免疫荧光检测到高水平Flag标签表达,且信号主要位于胞膜;经HBV病毒感染性培养基孵育24 h后,免疫荧光在细胞内检测到HBc Ag,在培养上清中检测到HBs Ag、HBe Ag,Real-time PCR检测到细胞内HBV复制中间体(6.57±0.36)×106拷贝/孔。结论:成功建立稳定高表达h NTCP的L-02-NTCP细胞系,可以被HBV颗粒自然感染,为研究HBV入侵细胞的机制和抗病毒药物筛选提供新的模型。

• 单位
  湖北医药学院; 十堰市太和医院