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摘要
从海洋微生物橙黄小单孢菌(Micromonosprra aurantiaca)的基因组DNA中克隆到一条新型的碳水化合物18家族几丁质酶基因Machi3，并成功在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达。该酶的最适反应温度和pH分别为55℃和7.0，在低于55℃和pH 6.0～9.0范围内稳定性较好。镁离子(Mg2+)、钙离子(Ca2+)、吐温40 (Tween 40)和吐温80 (Tween 80)对MaChi3的酶活力有轻微的促进作用。该重组酶对α-几丁质、胶体几丁质、虾壳粉、不同脱乙酰度(50%～95%)的壳聚糖、淀粉及纤维素均具有水解活性，其中以胶体几丁质为底物时酶活力最高(2.24 U·mg-1)。由扫描电镜结果可知，几丁质经盐酸(HCl)预处理后得到的胶体几丁质纤维结构变得松散，更有利于MaChi3的水解作用。以胶体几丁质为底物时动力学参数Km和Vmax值分别为5.93 mg·mL-1和8.58μmol·(min·mg)-1。此外，胶体几丁质经Ma Chi3酶解后生成的主产物为N, N-二乙酰基壳二糖，产率(几丁质)为285.54 mg·g-1。该酶展现出良好的酶学特性，为其在几丁质资源中的开发和应用奠定了基础。
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