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摘要
本研究旨在探索猪囊胚体外持续发育的关键影响因素，为构建支持猪胚胎体外发育至三胚层分化阶段的培养体系奠定基础。采用孤雌激活后6 d的猪囊胚进行体外持续培养，通过检测分析发育至8 d的猪孤雌囊胚的形态学特征和基因表达情况，系统评价PZM-3、Advanced DMEM/F12和KnockOutTMDMEM/F12基础培养体系，以及胎牛血清（Fetal Bovine Serum,FBS）、血清替代物（Knockout Serum Replacement,KSR）、L-谷氨酰胺（L-Glutamine）和胰岛素-转铁蛋白-硒-氨基乙醇（Insulin-Transferrin-Selenium-X,ITS-X）等成份对猪囊胚体外持续发育的作用，建立猪囊胚体外持续发育培养体系；通过TUNEL和免疫荧光方法检测该体系对猪囊胚的影响。结果表明：AKGI(Advanced DMEM/F12组合添加5%KSR、4 mmol/L L-Glutamine和1×ITS-X)为猪囊胚体外持续发育最适培养体系，可增加囊胚直径和囊胚细胞数（P<0.05），降低凋亡细胞比例（P<0.01），增加内细胞团（Inner Cell Mass,ICM）细胞数（P<0.05），促使NANOG在猪囊胚ICM中特异性表达。结果证明，AKGI培养体系是猪囊胚体外持续发育最佳体系，支持猪囊胚在体外发育至8 d，为建立猪孵化后胚胎体外持续发育培养体系奠定了基础。
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