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摘要
背景姜黄素是从姜的根茎中提取的物质,可抑制多种内皮细胞和上皮细胞的增生,但其抑制视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的作用及机制鲜见报道。目的研究姜黄素对体外培养的人RPE细胞增生的抑制作用及机制。方法第5代人RPE细胞株接种于96孔板,分别加入5、10、15、20 mg/L姜黄素分别作用24、48和72 h,未加入姜黄素的作为对照,采用水溶性四氮唑-1(WST-1)检测各组人RPE细胞的增生情况和细胞活性(A值);采用流式细胞术检测姜黄素作用后RPE细胞的凋亡率、坏死率和不同细胞周期的细胞比例;透射电子显微镜(TEM)观察细胞超微结构的变化;采用Western blot法检测RPE细胞中促凋亡因子p53、p21~(WAF1/CIP1)和增生细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达。结果 WST-1检测显示,随着姜黄素质量浓度的增加,人RPE细胞的A值逐渐降低,差异有统计学意义(F_(质量浓度)=96.55,P=0.00);随着姜黄素作用时间的延长A值逐渐增加,差异有统计学意义(F_(时间)=4634.28,P=0.00)。流式细胞术检测表明,15 mg/L姜黄素作用48 h早期凋亡细胞率为(13.37±1.26)%,明显高于对照组的(7.03±0.37)%,差异有统计学意义(t=8.33,P=0.00),姜黄素作用72 h,早期凋亡细胞率及中晚期凋亡细胞率分别为(15.97±0.16)%和(0.26±0.03)%,明显高于对照组的(7.29±0.37)%和(0.14±0.02)%,差异均有统计学意义(t=37.80、7.44,均P=0.00)。15 mg/L姜黄素作用48 h后人RPE细胞处于G_0/G_1期细胞比例为(57.17±1.17)%,明显低于对照组的(67.73±1.10)%,差异有统计学意义(t=11.40,P=0.00)。姜黄素作用后人RPE细胞可见线粒体肿胀和空泡样变性。Western blot检测显示,15 mg/L姜黄素作用24、48、72 h后p53和p21~(WAF1/CIP1)蛋白相对表达值均明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05),而15 mg/L姜黄素作用24、48、72 h PCNA蛋白的相对表达水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论姜黄素可有效抑制体外培养的人RPE细胞增生,其抑制作用呈剂量和时间依赖性,其作用机制可能与p53信号通路有关。
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