吕氏泰勒虫TlSP基因多态性免疫区在毕赤酵母中的高效分泌表达

作者：郭鹏飞; 韩元; 刘军龙; 刘爱红; 王锦明; 李禤; 关贵全; 殷宏; 罗建勋; 刘光远; 刘志杰; 李有全

来源：中国兽医科学, 2018, 48(02): 135-141.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2018.0021

• 吕氏泰勒虫
• TlSP基因
• 毕赤酵母
• 分泌表达
• 反应原性

为研制具有完整抗原性和天然结构的吕氏泰勒虫表面蛋白TlSP(Theileria luwenshuni surface protein),采用RT-PCR方法从吕氏泰勒虫裂殖子总RNA反转录获得TlSP基因的c DNA序列,将其多态性免疫区域克隆至毕赤酵母表达载体p PIC9K,构建重组质粒p PIC9K-TlSP。p PIC9K-TlSP经SalⅠ酶切线性化后,电转化导入毕赤酵母菌株GS115和KM71中,经遗传霉素G-418筛选后得到高拷贝菌株,对PCR鉴定为阳性的菌株进行甲醇诱导表达。对GS115和KM71两种菌株表达重组蛋白TlSP的效果进行评估,并对TlSP的反应原性进行了分析。结果表明,反转录获得的TlSP基因的c DNA序列长为888 bp,其中多态性免疫区域长为552 bp;筛选得到抗遗传霉素G-418(4.0 mg/m L)的GS115菌株5株,KM71菌株7株,经PCR鉴定为阳性的2种菌株均成功表达了分泌型重组蛋白TlSP,GS115菌株的蛋白表达效果较好;重组蛋白TlSP能与吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫及环形泰勒虫阳性血清发生反应,而与巴贝斯虫、绵羊无浆体阳性血清无反应。本研究为深入研究TlSP蛋白在羊泰勒虫病免疫学诊断和亚单位疫苗中的应用奠定了基础。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室