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摘要
脯氨酰内肽酶（Prolyl endopeptidase， PEP）能够特异性识别底物肽链中的脯氨酸残基并进行酶解切割，为探究脯氨酰内肽酶在骨胶原蛋白肽酶法制备过程中的应用潜力，分别以牛骨胶原蛋白（bovine bone collagen，BBC）、猪骨胶原蛋白（porcine bone collagen，PBC）、鸡骨胶原蛋白（chicken bone collagen，CBC）为原料，对比分析三种不同来源骨胶原蛋白的序列特征，预测不同骨胶原蛋白潜在的酶解作用位点和理论水解度。在55℃，pH 8.0条件下，PEP酶解处理三种不同来源骨胶原蛋白，通过水解度、分子量分布、扫描电子显微镜等方法进行表征。利用红外光谱、X射线衍射和圆二色谱等方法探究酶解过程中胶原蛋白结构变化。结果表明，PEP对三种不同来源骨胶原蛋白均有显著水解效应，猪骨胶原蛋白的水解度最高为51.35%，其次分别为牛骨胶原蛋白22.81%和鸡骨胶原蛋白29.81%。三种骨胶原蛋白酶解产物分子量多分布在500 Da以下。光谱学分析表明PEP破坏了胶原蛋白的三螺旋结构，从而对胶原蛋白进行降解，以达到制备胶原蛋白肽的效果。结论：脯氨酰内肽酶可以高效酶解骨胶原蛋白制备小分子蛋白肽，为功能性骨胶原蛋白肽的酶法制备提供依据。
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