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摘要
本研究将CSFV Erns和E2基因的主要抗原区进行克隆，构建pET32a-Erns和pET32aEK-E2重组质粒，将其转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达和纯化，以纯化的rErns、rE2重组蛋白为包被抗原，经条件优化，分别建立CSFV rErns和rE2抗体间接ELISA检测方法。SDS-PAGE结果显示，分别获得约为47 kDa和42 kDa的重组蛋白，rErns重组蛋白主要在上清液中存在，rE2重组蛋白主要以包涵体形式存在。Western blot结果显示，纯化后的重组蛋白具有良好的免疫原性。通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化，确定了Erns蛋白最佳包被量为2.5 μg/mL，rE2蛋白最佳包被量为0.625 μg/mL，待检血清最佳稀释倍数为1∶100，最佳封闭液为0.25% PVA溶液，HRP标记的兔抗猪IgG二抗最佳稀释度为1∶2000，临界值分别为0.24和0.33。上述方法仅与CSFV阳性血清发生特异性反应，检测敏感性可达到1∶1600，批内重复性和批间重复性变异系数均小于10%。本研究建立的间接ELISA方法可初步应用于CSFV Erns和E2抗体的检测，鉴别E2亚单位疫苗免疫抗体和野毒感染抗体，有利于猪瘟净化工作的实施。
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