淋巴细胞白血病缺失基因1调控miR-513a-5p和RANBP2通路对肾母细胞瘤细胞增殖凋亡的影响

作者：赵静丽; 赵丽丽; 牛文忠; 丁显春^*; 张文林

来源：中华肿瘤杂志, 2020, 42(10).

• 淋巴细胞白血病缺失基因1
• miR-513a-5p
• RANBP2
• 肾母细胞瘤

目的探讨淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)、miR-513a-5p和RANBP2在肾母细胞瘤中的调控作用及机制。方法采用脂质体法转染pcDNA(pcDNA组)、pcDNA-DLEU1(pcDNA-DLEU1组)、miR-NC(miR-NC组)、miR-513a-5p模拟物(miR-513a-5p组)、pcDNA-RANBP2(pcDNA-RANBP2组)、pcDNA-DLEU1+miR-NC(pcDNA-DLEU1+miR-NC组)、pcDNA-DLEU1+miR-513a-5p(pcDNA-DLEU1+miR-513a-5p mimics组)、miR-513a-5p+pcDNA(miR-513a-5p mimics+pcDNA组)和miR-513a-5p+pcDNA-RANBP2(miR-513a-5p mimics+pcDNA-RANBP2组)至肾母细胞瘤GHINK-1细胞中。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测肾母细胞瘤组织、癌旁组织、正常肾细胞HK2和肾母细胞瘤细胞GHINK-1中DLEU1、miR-513a-5p和RANBP2的表达水平, Western blot检测PCNA、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平, 细胞计数试剂盒8法检测细胞的存活率, 流式细胞术检测细胞的凋亡率, 双荧光素酶报告实验检测细胞的荧光素酶活性。结果 DLEU1、miR-513a-5p和RANBP2在癌旁组织中的表达水平分别为1.02±0.08、1.01±0.06和1.00±0.05, 与肾母细胞瘤组织(分别为5.16±0.24、0.23±0.02和1.67±0.09)比较, 差异均有统计学意义(均P<0.05);DLEU1、miR-513a-5p和RANBP2在HK2细胞中的表达水平分别为1.00±0.06、1.00±0.08和1.02±0.09, 与GHINK-1细胞(分别为3.15±0.21、0.18±0.01和1.54±0.10)比较, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。过表达DLEU1后, pcDNA组GHINK-1细胞的凋亡率[(12.35±1.12)%]与pcDNA-DLEU1组[(7.35±0.41)%]比较, 差异有统计学意义(P<0.05)。过表达RANBP2后, pcDNA组GHINK-1细胞的凋亡率[(12.64±1.12)%]与pcDNA-RANBP2组[(8.89±0.48)%]比较, 差异有统计学意义(P<0.05)。miR-513a-5p组DLEU1-WT和RANBP2-WT细胞的荧光素酶活性分别为0.43±0.04和0.61±0.07, 与miR-NC组(分别为1.01±0.06和0.99±0.06)比较, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。anti-miR-513a-5p组DLEU1-WT和RANBP2-WT细胞的荧光素酶活性分别为1.34±0.11和1.39±0.13, 与anti-miR-NC组(分别为0.99±0.07和0.98±0.05)比较, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。pcDNA-DLEU1+miR-NC组和pcDNA-DLEU1+miR-513a-5p组GHINK-1细胞的凋亡率分别为(8.51±0.69)%和(11.34±1.03)%, miR-513a-5p+pcDNA组和miR-513a-5p+pcDNA-RANBP2组GHINK-1细胞的凋亡率分别为(15.94±1.00)%和(9.96±0.72)%, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论长链非编码RNA DLEU1可促进肾母细胞瘤细胞的增殖, 其机制与靶向调控miR-513a-5p和RANBP2功能有关, 可为肾母细胞瘤的治疗提供理论支持。

• 单位
  河南省肿瘤医院; 南阳市中心医院