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摘要
目的探索异补骨脂素对体外培养小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨和成脂分化的影响及其作用机制。方法选取18只2个月大的无特定病原体级雌性C57/BL6小鼠,分离BMSCs。通过细胞培养、细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)染色实验、油红0染色实验建立并鉴定成骨、成脂细胞诱导,诱导14 d后检测核心结合蛋白因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(]PPAR-γ)、CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBP-β)确定浓度分别为0(对照组)、5、10、20μmol/L异补骨脂素的作用;并通过蛋白免疫印迹实验检测BMSCs成骨诱导及成脂诱导信号通路中P-S6(S235/236)、4E/BP1(Thr37/46)的表达。结果成骨诱导14 d后10、20μmol/L组的BMSCs内ALP阳性表达量分别较对照组、5μmol/L组有增加,20μmol/L组ALP表达最强。5、10、20μmol/L组RUNX2、OCN的表达均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05),20μmol/L组RUNX2、OCN表达量最大。成脂诱导14 d后5、10、20μmol/L的异补骨脂素浓度均能抑制BMSCs中PPAR-γ、C/EBP-β的表达,差异有统计学意义(P<0.05),而20μmol/L的异补骨脂素抑制效果最强。成骨诱导14 d后P-S6(S235/236)明显下降,且20μmol/L组最低,而4E/BP1(Thr37/46)的表达明显上升,对照组表达是最低。成脂诱导14 d后P-S6(S235/236)表达明显上升,对照组P-S6(S235/236)表达最低,而4E/BP1(Thr37/46)的表达随异补骨脂素浓度的升高明显下降,且20μmol/L组最低。结论异补骨脂素增强小鼠BMSCs成骨作用,抑制其向脂肪细胞分化,并证实异补骨脂素是通过抑制mTORC1信号通路活性抑制BMSCs向脂肪细胞分化。
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单位南方医科大学南方医院; 内蒙古自治区人民医院; 南方医科大学第三附属医院
