新型隐球菌Cap10蛋白的重组表达及多克隆抗体制备

作者：王欣; 于虹; 佟双; 杨裔; 高基民; 寇志华; 周育森

来源：中国卫生检验杂志, 2012, 22(06): 1229-1231+1236.

• 新型隐球菌
• 荚膜相关蛋白10(Cap10)
• B细胞表位
• 多克隆抗体

目的:重组表达新型隐球菌Cap10蛋白并制备特异抗体,为新型隐球菌的检测和诊断提供特异抗原和抗体。方法:选择CAP10基因开放阅读框架(ORF)抗原表位集中、保守性高的片段,经过大肠杆菌偏嗜的密码子优化后进行基因合成,将目的片段克隆至原核表达载体pQE30中构建重组蛋白表达载体pQE30-CAP10并鉴定,IPTG诱导重组蛋白在M15中表达,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定;镍柱纯化后,免疫家兔制备抗血清。结果:在大肠杆菌中成功表达Cap10,其纯度大于95%;二免后家兔血清抗体效价达到200万以上。结论:获得了高纯度的Cap10蛋白及高效价的多克隆抗体,为新型隐球菌的检测和致病机制研究奠定了基础。

• 单位
  温州医学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室