总HIV-1 DNA定量检测技术的建立

作者：刘志英; 袁霖; 张欣; 陆小凡; 刘利锋; 计云霞; 夏炜; 粟斌; 吴昊; 张彤^*

来源：中国艾滋病性病, 2019, 25(03): 222-235.

DOI：10.13419/j.cnki.aids.2019.03.02

• 艾滋病病毒
• 储藏库
• 总1型艾滋病病毒脱氧核糖核酸
• 定量

目的建立一种基于实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法的1型艾滋病病毒(HIV-1)总脱氧核糖核酸(DNA)定量检测技术。方法构建了同时包含HIV靶基因和内参基因的质粒标准品,设计了涵盖我国主要HIV流行亚型的特异性引物和Taqman水解探针,对引物亚型覆盖面、灵敏度、特异性等相关指标进行了分析,进行了批内和批间重复试验。结果该检测方法所设计的HIV特异性引物和探针序列高度保守,成功检测12种常见及稀有HIV亚型;扩增灵敏度可达4个拷贝/PCR反应管,特异度100%;加入了细胞定量体系,做到了在同一个PCR反应管中既定量了HIV DNA,又定量了细胞数;批内和批间差异性的变异系数均在20%以内。结论该检测方法可用于HIV储藏库检测,评估联合抗病毒治疗的效果,可以用于"窗口期"HIV感染的辅助诊断以及HIV阳性母亲的新生儿HIV感染的诊断。

• 单位
  首都医科大学附属北京佑安医院