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摘要
为研究核不均一核糖核蛋白M（hnRNP M）是否在塞内卡病毒（SVA）复制过程中发挥作用，本研究通过在过表达或敲低hnRNP M的仓鼠肾细胞（BHK-21）细胞中接种SVA然后利用western blot检测SVA结构蛋白VP2和病毒滴度的TCID50分析来确定hnRNP M对SVA病毒复制的影响，结果表明过表达hnRNP M蛋白明显抑制SVA在BHK-21细胞中的复制，而敲低hnRNP M蛋白能显著促进SVA在BHK-21细胞中的复制。通过在接种SVA病毒的BHK-21细胞中进行RNA免疫共沉实验对所获得的沉淀物利用SVA基因组特异性引物经PCR检测，结果表明宿主细胞hnRNP M蛋白和SVA基因组RNA存在相互作用。通过激光共聚焦试验来检测SVA基因组和hnRNP M的定位情况，结果显示SVA感染宿主细胞后hnRNP M从细胞核转移至细胞质中，并与SVA基因组RNA在细胞质中共定位。此外，通过双荧光素酶报告基因试验分别在过表达hnRNP M和敲低hnRNP M的细胞中检测SVA内部核糖体进入位点（IRES）的活性，结果显示过表达hnRNP M蛋白能够抑制SVA IRES介导的翻译活性，而下调hnRNP M蛋白的表达则能够促进IRES的活性。本研究首次证实了宿主细胞蛋白hnRNP M与SVA病毒基因组存在相互作用、抑制IRES的翻译活性、并抑制病毒的复制，为深入研究SVA复制的分子调控机制奠定了基础。
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单位中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室
