非洲猪瘟病毒p17蛋白的哺乳动物细胞表达及鉴定

作者：乔思娜; 赵款; 刘佳晨; 李国新; 童武; 周艳君; 赵冉; 童光志; 高飞^*; 李丽薇^*

来源：畜牧与兽医, 2023, 55(03): 68-73.

• 非洲猪瘟病毒
• p17蛋白
• 293i细胞
• 多克隆抗体

研究旨在利用哺乳动物细胞悬浮培养系统表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p17蛋白，纯化并免疫小鼠，制备针对ASFV p17蛋白的特异性多克隆抗体。根据GenBank中公布的ASFV SY18毒株p17蛋白编码基因序列，设计特异性引物扩增p17基因片段，构建重组真核表达质粒pCDNA3.1-p17-strep。将其瞬时转染293i细胞，并利用下游strep标签进行蛋白纯化。纯化后的重组p17蛋白配合MnJ(β)胶体锰佐剂免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体血清。利用Western blot、间接免疫荧光试验鉴定该多克隆抗体的反应原性和特异性。结果显示：本试验成功构建pCDNA3.1-p17-strep真核表达质粒，转染293i细胞后纯化获得重组p17蛋白。免疫小鼠后制备的多克隆抗体与真核表达的p17蛋白及表达ASFV p17蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒均有良好的特异性免疫反应。本试验为深入探讨ASFV p17蛋白的生物学功能奠定了基础。

• 单位
  河北农业大学; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 中国农业科学院上海兽医研究所