基因沉默SIRT7抑制缺氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖及迁移

作者：张莹; 高砚丽; 任引刚^*

来源：山西医科大学学报, 2023, 54(10): 1354-1361.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2023.10.008

• 肺动脉高压
• 肺动脉平滑肌细胞
• 细胞增殖
• 细胞迁移
• SIRT7
• TGF-β1

目的 研究沉默信息调节因子2相关酶类7(silent information regulator 2 related enzyme 7,SIRT7)对低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells, HPASMCs)增殖和迁移的调控作用，并探讨可能的分子作用机制。方法 体外培养HPASMCs建立低氧模型。通过慢病毒介导的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默SIRT7在HPASMCs中的表达。实验分为4组：常氧对照组、低氧组、低氧+LV-sh-Ctrl组和低氧+LV-sh-SIRT7组。低氧+LV-sh-Ctrl组HPASMCs感染对照重组腺病毒LV-sh-Ctrl,然后进行低氧处理。低氧+LV-sh-SIRT7组HPASMCs感染表达SIRT7 shRNA的重组腺病毒LV-sh-SIRT7,然后进行低氧处理。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测SIRT7的mRNA表达水平。采用Western blotting检测SIRT7、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、转化生长因子β受体Ⅰ(transforming growth factor-β receptorⅠ,TβRⅠ)、Smad2和Smad3的蛋白表达量。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)和5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine, EdU)实验检测细胞增殖。采用流式细胞术检测细胞凋亡。采用Transwell实验检测细胞迁移。结果 与常氧对照组比较，低氧组和低氧+LV-sh-Ctrl组SIRT7表达水平显著升高(P<0.01),细胞增殖和迁移水平显著提高(P<0.01),细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与低氧组和低氧+LV-sh-Ctrl组比较，低氧+LV-sh-SIRT7组SIRT7表达水平显著降低(P<0.01),细胞增殖和迁移水平显著下降(P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。与常氧对照组比较，低氧组和低氧+LV-sh-Ctrl组TGF-β1、TβRⅠ、p-Smad2和p-Smad3的蛋白表达量显著增加(P<0.01);与低氧组和低氧+LV-sh-Ctrl组比较，低氧+LV-sh-SIRT7组TGF-β1、TβRⅠ、p-Smad2和p-Smad3的蛋白表达量显著减少(P<0.01)。结论 基因沉默SIRT7通过调控TGF-β1/Smad信号通路抑制缺氧诱导的HPASMCs增殖和迁移。

• 单位
  中国人民解放军空军军医大学