腺相关病毒2-ND4基因转染细胞线粒体的研究

作者：杨硕; 刘磊; 裴晗; 万幸; 陆朵朵; 胡维琨; 李斌

来源：中华实验眼科杂志, 2014, 32(08): 693-695.

DOI：10.3760/cma.j.issn.2096-0160.2014.08.005

• Leber遗传性视神经病变/治疗
• 基因疗法
• 线粒体DNA/遗传
• 转染
• 腺相关病毒
• 视神经节细胞
• 细胞系
• Y03双荧光量子点

背景 Leber遗传性视神经病变(LHON)是导致视神经退行性变的线粒体遗传性疾病,主要与线粒体11778位点突变导致ND4蛋白合成异常有关,构建含正常ND4蛋白的载体是基因治疗的关键。由于ND4 DNA存在于线粒体,而转染的外源基因只能进入细胞核,不能作用于突变的线粒体DNA。探讨将ND4基因成功转染到线粒体是LHON的基因治疗的关键。目的验证人工合成的ND4基因所构建的重组腺相关病毒(AAV)转染细胞后产生的ND4蛋白能否进入线粒体。方法常规体外培养转染腺病毒EIA基因的人肾上皮细胞系(293细胞),将细胞分为AAV-ND4转染组和单纯AAV转染组,分别将两种转染液加至各组的培养基中,分别于转染后12、24、36和48 h用Y03量子点免疫荧光法检测细胞质中ND4的表达,细胞质中绿色荧光为ND4表达阳性。结果培养的293细胞生长良好,达到80%融合。荧光显微镜下显示,AAVND4基因转染组293细胞质中可见大量绿色荧光,而单纯AAV转染组仅可见线粒体蛋白红色荧光。结论 AAV-ND4基因转染细胞后产生的ND4蛋白能够进入线粒体,为LHON的基因治疗提供了实验依据。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院