阿胶不同酶解物HPLC指纹图谱建立

作者：付英杰; 王肖; 贾玉民; 侯林; 王建安; 于定荣; 赵颖异

来源：中成药, 2022, 44(08): 2731-2735.

• 阿胶
• 酶解
• HPLC
• 指纹图谱
• 方法学

目的 建立阿胶多种酶解物HPLC指纹图谱。方法 对流动相选择、酶种类筛选、酶用量、辅料、试剂及酶干扰的考察，通过精密度、稳定性、重现性、验证性试验，以HPLC色谱图峰形、相似度等为指标，确定分析方法。Dikma C18色谱柱；流动相0.2 mol/L Na2SO4-H3PO4(pH 2.3)(A)-90%乙腈(B),梯度洗脱；体积流量1 mL/min;进样量20μL;检测波长280 nm。结果 取5%阿胶水炖化液，分别加入100 000 U/g胃蛋白酶、25 000万U/g胰蛋白酶、300 000 U/g木瓜蛋白酶、25 000 U/g糜蛋白酶，调pH后于40℃酶解4 h,接着95℃灭活20 min,依次用脱脂棉、定量滤纸、0.45μm微孔滤膜过滤，制成4个样品。阿胶辅料、加入试剂及胰蛋白酶对分析无干扰，其他酶需排除干扰。精密度及重现性图谱相似度>0.9,保留时间RSD<2%,多数峰面积RSD<10%。样品冷冻需不超过2 d。除胃蛋白酶外，其余3种酶解物保留时间RSD<2%,相似度>0.9。结论 采用不同蛋白酶的酶解产物作为样品进行特征谱带研究，其信息量更大，且由于酶切位点固定，各样品的酶解物组成相对稳定。为后续进行的酶解物-HPLC法对阿胶特征峰及规律研究提供参考。

• 单位
  中国中医科学院中药研究所; 济宁医学院; 东阿阿胶股份有限公司; 山东中医药大学