circNOX4通过靶向EZH2调控肝内胆管癌细胞增殖

作者：童焕军; 于小鹏; 陈家璐; 全志伟; 汤朝晖^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(12).

• 肝内胆管癌
• circNOX4
• EZH2
• 增殖

目的探讨circNOX4通过靶向EZH2调控肝内胆管癌(ICC)细胞增殖的分子机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测正常胆管上皮细胞(H69)和ICC细胞系(HCCC-9810、RBE、CCLP1、QBC939)中circNOX4的表达水平。荧光原位杂交技术(FISH)和核质分离实验确定circNOX4的亚细胞定位。EDU实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证circNOX4对ICC细胞增殖的影响。蛋白质印迹法(Western blot)明确circNOX4与EZH2的相关性。两组间比较应用t检验, 多组间比较应用单因素方差分析。结果 ICC细胞系circNOX4表达高于人正常胆管上皮细胞H69(H69:1.008±0.156, HCCC-9810:1.584±0.429, CCLP1:2.951±0.222, QBC939:6.404±0.511, RBE:10.305±2.988, F=23.97, P<0.05)。FISH实验和核质分离qRT-PCR实验可知, circNOX4主要分布于细胞核内。敲减circNOX4可以使RBE(2 d:siNC:0.646±0.119;sicircNOX4:0.358±0.032, t=4.67P<0.05;3 d:siNC:1.041±0.052;sicircNOX4:0.620±0.084, t=8.54, P<0.05;4 d:siNC:1.707±0.070;sicircNOX4:1.007±0.081;t=13.07, P<0.05)和QBC939(2 d:siNC:0.534±0.010;sicircNOX4:0.403±0.017, t=13.52, P<0.05;3 d:siNC:0.887±0.034;sicircNOX4:0.589±0.023, t=14.68, P<0.05;4 d:siNC:1.496±0.151;sicircNOX4:0.865±0.122, t=6.51, P<0.05)细胞的增殖受到抑制。Western blot结果可知敲减circNOX4可以抑制EZH2的蛋白表达, 敲减circNOX4同时回复EZH2可以恢复细胞增殖能力(4 d:siNC:1.611±0.061;sicircNOX4:0.810±0.025;sicircNOX4+EZH2:1.485±0.026;siNC比sicircNOX4:t=25.90, P<0.05;sicircNOX4比sicircNOX4+EZH2:t=37.56, P<0.05)。结论 circNOX4在ICC细胞系中高表达, 并通过介导EZH2的表达调控细胞增殖能力。

• 单位
  上海交通大学医学院附属新华医院