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摘要
目的初步探究circIGF2BP3对光老化皮肤成纤维细胞自噬水平的影响。方法取中山大学附属第三医院泌尿外科6例儿童包皮环切术后包皮组织, 分离培养成纤维细胞, 以每日10 J/cm2长波紫外线(UVA)连续照射14 d, 建立UVA诱导的光老化成纤维细胞模型(UVA处理组), 未经处理的正常成纤维细胞作为对照组, β半乳糖苷酶染色、Western印迹法检测P21蛋白表达, CCK8法检测细胞活力验证建模是否成功。Western印迹法检测光老化成纤维细胞中自噬相关蛋白P62、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ表达, qRT-PCR验证光老化与正常成纤维细胞间circIGF2BP3表达差异, 并对其进行生物学注释。将原代成纤维细胞分为4组:空载组、UVA +空载组, circIGF2BP3过表达组、UVA+ circIGF2BP3过表达组, Western印迹法检测各组细胞中自噬相关蛋白表达水平。两独立样本均数的比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析, 组间两两比较采用LSD-t检验。结果 UVA处理组β半乳糖苷酶染色阳性率(61.33% ± 5.78%)、P21蛋白表达(1.25 ± 0.03)均显著高于对照组(6.37% ± 0.32%、1.00 ± 0.05, t = 9.49、4.26, P < 0.01、< 0.05), 而细胞活力(74.33% ± 3.48%)显著低于对照组(100%, t = 7.38, P < 0.01)。UVA处理组P62蛋白表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值均显著高于对照组(均P < 0.05)。光老化成纤维细胞中circIGF2BP3的相对表达量为0.72 ± 0.04, 显著低于对照组(1.00 ± 0.03), t = 5.46, P < 0.01。circIGF2BP3过表达组P62蛋白表达(0.60 ± 0.01)及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(0.71 ± 0.01)均显著低于空载组(1.00 ± 0.02、1.00 ± 0.01;t = 16.25、2.75, P < 0.01、P < 0.05);UVA + circIGF2BP3过表达组P62蛋白表达(1.05 ± 0.02)及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(2.04 ± 0.05)亦均显著低于UVA +空载组(1.31 ± 0.02、2.72 ± 0.14;t = 10.49、6.47, 均P < 0.01)。结论 circIGF2BP3可调控UVA诱导的光老化皮肤成纤维细胞自噬水平, 为防治光老化提供了新的潜在治疗靶点。
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