人疱疹病毒6型三重芯片式数字PCR方法的建立

作者：王文军; 宋娟; 王瑞芳; 万以秋; 魏泽; 姚海兰^*; 韩俊^*

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2021, 35(05).

• 人疱疹病毒6型
• 三重芯片式数字PCR
• 染色体整合HHV-6

目的建立同时检测疱疹病毒(human herpesvirus, HHV)-6A、B和核糖核酸酶P/MRP 30 kDa亚基(RPP30)的三重芯片式数字PCR(chip digital PCR, cdPCR)方法确定HHV-6A与HHV-6B感染的病毒载量, 及高病毒载量的HHV-6是否由病毒整合到染色体导致。方法根据已建立的HHV-6A、HHV-6B实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR)方法, 建立HHV-6三重cdPCR方法。分别使用HHV-6A、HHV-6B病毒培养物进行敏感性检测, 并与其他疱疹病毒进行特异性检测。随后, 使用127份全血样本进行三重cdPCR方法验证。结果 HHV-6 cdPCR与RT-qPCR方法检测结果的相关性良好(R2>0.97), 且与其他疱疹病毒无交叉反应。对经RT-qPCR与cdPCR检测均为阳性的14份样本, 经三重cdPCR方法检测, 得到HHV-6A和HHV-6B的最低检测病毒载量分别为50拷贝/ml和105拷贝/ml。并且14份样本中HHV-6病毒载量与(RPP30拷贝数/2)的比值均小于1。结论建立的三重cdPCR具有较好的敏感性和特异性, 且HHV-6三重cdPCR方法可以定量检测HHV-6A、HHV-6B的病毒载量以及RPP30的拷贝数。通过检测样本中HHV-6病毒载量与(RPP30拷贝数/2)的比值, 可以确定高病毒载量的HHV-6是否存在染色体整合。

• 单位
  传染病预防控制国家重点实验室; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 首都儿科研究所