珍珠龙胆石斑鱼Claudin-3与Claudin-12基因的克隆表达及其在不同精氨酸水平饲料下的表达响应

作者：李广; 崔晓; 姚春凤; 陈东鸿; 何凯; 陈冠霖; 韩煜轩; 杨奇慧; 迟淑艳

来源：大连海洋大学学报, 2021, 1-13.

DOI：10.16535/j.cnki.dlhyxb.2021-083

• 珍珠龙胆石斑鱼
• 紧密连接蛋白
• 基因克隆
• 精氨酸
• 黏膜屏障

为了评价Claudin-3与Claudin-12在珍珠龙胆石斑鱼生长和肠道粘膜屏障中的作用，通过同源克隆及RACEPCR技术克隆珍珠龙胆石斑鱼Epinephelusfuscoguttatus♀×E.lanceolatu♂Claudin-3和Claudin-12基因的全长，并采用RealTime-qPCR技术分析Claudin-3和Claudin-12基因在珍珠龙胆石斑鱼脑，鳃，皮肤，肌肉，肝脏，胃，前肠，中肠，后肠，头肾，体肾，脾，心脏13种组织的表达情况，并且通过饲料精氨酸干预评估上述两个基因在肠道表达的情况。结果表明：Claudin-3cDNA全长序列为1544bp，包括一个153bp的5’-末端非翻译区（UTR）和743bp的3’-UTR，Claudin-3的开放阅读框（ORF）为648bp，编码215个氨基酸的预测蛋白，预测蛋白分子量为23.1kDa；Claudin-12的cDNA全长序列为1236 bp，包括一个118bp的5’- UTR和92 bp的3’-UTR。Claudin-12的ORF为1026 bp，编码341个氨基酸的预测蛋白，预测蛋白相对分子质量为37 400。系统进化树和氨基酸序列比对结果表明，珍珠龙胆石斑鱼基因Claudin-3与高体鰤的亲缘性最近，同源性高达98%；Claudin-12基因与鮣鱼同源性最高，为91%；珍珠龙胆石斑鱼Claudin-3和Claudin-12基因在被检测的13种组织均有表达，Claudin-3基因在鳃和体肾中mRNA表达量显著高于其他组织（P＜0.05），其次是中肠和肝脏；Claudin-12基因在脑中表达量显著高于其他组织（P＜0．05），其次是中肠和后肠；饲料精氨酸含量为3.06%时，珍珠龙胆石斑鱼增重率及肠道Claudin-3和Claudin-12基因表达水平显著高于1.96%和3.74%精氨酸组（P<0.05）。研究表明，Claudin-3和Claudin-12基因表达在适宜精氨酸水平的影响下上调，维护石斑鱼肠道黏膜屏障完整，促进鱼体生长。

• 单位
  广东粤海饲料集团股份有限公司; 南方海洋科学与工程广东省实验室（湛江）; 广东海洋大学