牛痘相关激酶1在小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及机制

作者：陆倩茹; 孙雄山^*; 杨永健^*

来源：中国病理生理杂志, 2023, 39(01): 88-95.

• 肺动脉血管平滑肌细胞
• 牛痘相关激酶1
• 细胞增殖
• 细胞迁移

目的：探讨牛痘相关激酶1(vaccinia-related kinase 1, VRK1)在小鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cells, PASMCs）增殖及迁移中的作用及机制。方法：培养小鼠肺动脉平滑肌细胞系，细胞传至第3代至第5代细胞进行后续实验。在低氧条件下检测不同低氧时间干预后PASMC中VRK1蛋白水平的变化。为探究VRK1在低氧所致PASMCs增殖和迁移中的作用，通过携带Vrk1特异短发夹RNA(Vrk1 short hairpin RNA,sh Vrk1)或相关阴性对照RNA(shCon)的慢病毒转染PASMCs，将转染后的PASMCs分别进行常氧、低氧处理，Western blot检测VRK1和β-catenin蛋白水平变化，采用Ki-67细胞免疫荧光染色法检测PASMCs的增殖活性，划痕实验检测PASMCs的迁移能力。加入40μmol/L SKL2001恢复β-catenin活性后再次检测上述指标。结果：与常氧组相比，低氧处理24 h和36 h后PASMCs中VRK1蛋白表达水平升高（P<0.01）。常氧培养条件下，sh Vrk1转染细胞中VRK1及β-catenin蛋白表达水平降低（P<0.01）。相较于常氧培养的shCon转染细胞，低氧条件下shCon转染细胞中Ki-67阳性细胞率升高，划痕愈合速度提高（P<0.01）。低氧培养条件下，sh Vrk1转染后细胞的Ki-67阳性细胞率降低，划痕愈合速度降低（P<0.01）。低氧培养条件下，sh Vrk1+SKL2001组β-catenin蛋白表达水平升高，Ki-67阳性细胞率及划痕愈合速度较sh Vrk1+DMSO组均升高（P<0.01）。结论：沉默Vrk1通过降低β-catenin的表达抑制低氧所致小鼠PASMCs体外的增殖和迁移。

• 单位
  西南交通大学