CHK1shRNA抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡

作者：张敏; 王海艳; 游泳; 陈智超; 邹萍

来源：中国病理生理杂志, 2008, 24(10): 1891-1894.

DOI：10.3321/j.issn:1000-4718.2008.10.005

• 检测点激酶1
• RNA干扰
• HeLa细胞
• 细胞凋亡

目的:构建针对CHK(checkpoint kinase,细胞周期检测点激酶)1基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA),观察其对高表达CHK1的宫颈癌细胞系-HeLa细胞凋亡和细胞周期的影响。方法:设计并合成了针对CHK1的shRNA,将其导入本室构建的携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的RNAi(RNA interference,RNA干扰)表达载体中。通过RT-PCR和Western blotting分别检测HeLa细胞CHK1基因和蛋白水平的表达,以流式细胞仪测细胞凋亡,MTT法检测细胞的增殖。结果:成功构建了携带EGFP的RNAi表达载体pEGFP-H1。与对照组和空载体转染组相比,shRNA使细胞中CHK1mRNA水平下降了66%,蛋白水平下降了60%。此外,shRNA转染组的HeLa细胞凋亡率明显高于对照组,其增殖活性则明显低于对照组。结论:本课题构建的RNAi表达载体便于观察靶基因的转染情况,且不影响H1启动子的体内转录。CHK1shRNA能诱导HeLa细胞凋亡,抑制该细胞的增殖,为进一步研究CHK1在肿瘤治疗中的作用机制提供了实验基础。

• 单位
  第一临床医学院; 三峡大学; 宜昌市中心人民医院; 华中科技大学同济医学院附属协和医院