Satb2基因慢病毒载体的构建及其鉴定

作者：陈晓霞; 颜世果; 李玉兰^*

来源：海南医学, 2020, 31(23): 2993-2997.

• 慢病毒
• 特殊富含AT序列结合蛋白2
• 牙周炎
• 牙周组织再生
• 293T细胞

目的构建特殊富含AT序列结合蛋白2 (Satb2)基因慢病毒表达载体并通过感染293T细胞检测目的基因的表达。方法采用PCR技术扩增目的基因Satb2,并在目的基因的上下游分别添加酶切位点PacⅠ和AscⅠ,将其PCR产物和目的载体用PacⅠ和AscⅠ分别进行双酶切,通过T4DNA ligase连接酶切后的PCR产物及目的载体,构建pLenti6.3-Satb2-IRES-EGFP慢病毒表达载体,通过菌液PCR、酶切及测序鉴定其结果;将阳性克隆质粒与包装质粒Mix共转染293T细胞,收集、浓缩病毒液并测定其浓度;将重组病毒液感染293T细胞,观察其荧光表达情况,通过q PCR检测目的基因表达。结果菌液PCR结果得到一条约2 202 bp的亮带,与目的基因大小相符;重组载体经过双酶切得到一条9.1 kb大片段及一条2 202 bp小片段;通过测序验证重组载体中Satb2基因序列与GenBank报道的序列完全一致,表明慢病毒表达载体构建成功。经过包装,重组慢病毒滴度达到7.9×107ifu/mL,该病毒液感染293T细胞后可观察到大量荧光,感染率约为70%,通过qPCR检测结果显示实验组Satb2 mRNA的表达量增加了约106倍(P<0.05)。结论本实验成功构建pLenti6.3-Satb2-IRES-EGFP慢病毒表达载体并包装出具有感染能力的慢病毒,为进一步研究该基因在牙周支持组织再生中的作用奠定基础。

• 单位
  山东大学口腔医学院; 陕西省康复医院