禽传染性法氏囊病实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者：张伟业; 薛俊龙^*; 常亚琦; 刘昊; 任静强

来源：黑龙江畜牧兽医, 2018, (20): 109-245.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2017.10.0341

• 禽
• 传染性法氏囊病
• 实时荧光定量PCR
• SYBR GreenⅠ
• 毒力
• 鉴别诊断

为了建立能够快速、准确鉴别禽传染性法氏囊病病原的分子学诊断方法,试验用中、强毒力传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因编码的结构蛋白裂解位点的核苷酸序列设计引物,建立了以SYBR GreenⅠ为荧光染料的实时荧光定量PCR检测IBDV中、强毒力毒株的方法,并用该方法检测临床可疑样本。结果表明:该方法选择的引物具有特异性,其建立的标准曲线具有重复性,与模板浓度呈现良好的线性关系。在线性浓度范围内,IBDV-2512熔解曲线为单一特征峰型,熔解温度(Tm)值位于88.10～90.35℃区间,为强毒力毒株;IBDV-MB Tm值位于82.95～84.05℃区间,为中等毒力毒株。用此法检测可疑样本,测定其属于强毒力毒株,通过测序及鸡胚半数致死量(ELD50)的测定,验证本方法的鉴定结果正确。说明IBDV的实时荧光定量PCR检测方法建立成功。

• 单位
  军事医学科学院军事兽医研究所; 山西省农业科学院畜牧兽医研究所