长链非编码RNA PRMT5-AS1调控电离辐射诱导肝癌细胞铁死亡机制的研究

作者：叶天霞; 应逸萌; 马淑梅; 刘晓冬^*

来源：中华放射医学与防护杂志, 2023, 43(12).

• PRMT5-AS1
• 电离辐射
• 细胞死亡
• 肝癌
• 铁死亡

目的探讨长链非编码RNA PRMT5-AS1对电离辐射诱导的肝癌细胞铁死亡的影响。方法在MHCC-97H细胞中构建PRMT5-AS1过表达模型, 在HepG2细胞中构建PRMT5-AS1敲低模型。使用X射线照射, 吸收剂量为10 Gy, 剂量率为3 Gy/min。采用Western blot和qRT-PCR实验检测基因表达水平。采用台盼蓝染色流式细胞术检测PRMT5-AS1表达对受照肝癌细胞脂质过氧化以及铁死亡的影响。采用CCK-8实验检测PRMT5-AS1表达水平对电离辐射照射后肝癌细胞死亡的影响。双荧光素酶报告实验检测let-7c-5p与PRMT5-AS1和SLC7A11之间结合作用。结果 MHCC-97H细胞中过表达PRMT5-AS1能够显著降低电离辐射引起的细胞死亡(对照组vs. PRMT5-AS1过表达组:27.57%vs.18.30%, t=14.94, P<0.05)。HepG2细胞中敲低PRMT5-AS1可显著增加电离辐射引起的细胞死亡(对照组vs. PRMT5-AS1敲低组:17.26%vs.28.26%, t=13.63, P<0.05)。过表达PRMT5-AS1能够明显抑制由电离辐射诱导的细胞内脂质活性氧(ROS)水平增加(对照组vs. PRMT5-AS1过表达组:17.01%vs.12.52%, t=12.80, P<0.05), 敲低PRMT5-AS1可显著增加电离辐射诱导的脂质ROS水平增加(对照组vs. PRMT5-AS1敲低组:14.54%vs.17.72%, t=5.93, P<0.05)。CCK-8实验结果表明, 过表达PRMT5-AS1能够显著抑制Erastin诱导的细胞活性降低(对照组vs. PRMT5-AS1过表达组:87.92%vs.109.06%, t=2.87, P<0.05), 敲低PRMT5-AS1则促进Erastin抑制细胞活性(对照组vs. PRMT5-AS1敲低组:82.56%vs.60.58%, t=38.35, P<0.05)。Western blot和荧光定量PCR结果表明, 过表达PRMT5-AS1能够明显提高SLC7A11的蛋白和mRNA水平(t=26.24, P<0.05), 敲低PRMT5-AS1后SLC7A11的蛋白和mRNA水平均显著降低(t=5.60, P<0.05)。荧光素酶报告基因实验表明PRMT5-AS1与let-7c-5p之间存在相互作用(t=9.74, P<0.05)。PRMT5-AS1可以与let-7c-5p形成ceRNA网络, 靶向调节SLC7A11。let-7c-5p能够逆转由过表达PRMT5-AS1引起的SLC7A11表达水平增加、脂质ROS水平和细胞死亡减少(t=3.01、4.11, P<0.05), 而敲低SLC7A11能够逆转PRMT5-AS1引起的脂质ROS抑制和细胞死亡减少(t=21.35、7.15, P<0.05)。结论长链非编码RNA PRMT5-AS1通过PRMT5-AS1/let-7c-5p/SLC7A11轴抑制电离辐射诱导肝癌细胞铁死亡的发生。

• 单位
  温州医科大学